大鼠膽總管插管(膽汁獲取實驗)實驗步驟
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第一步:麻醉大鼠(麻醉劑量和使用濃度及配制方法請百度,麻醉時間至少半小時以上。我們常用的戊巴比妥鈉鹽類),然后固定大鼠(大鼠固定板)。
第二步:用消毒酒精棉球消毒需要手術的部位(大鼠胸腔凸出下約1.5-3.5cm處,具體見下圖)。
第三步:剪開找到膽總管的位置,分離出膽總管。用購買的專用插管插進膽總管中(這一步中的插管很重要,軟硬合適的插管會使實驗很順利。)
如何找膽總管?在皮膚上開一個小口后,用鑷子輕輕打開看到里面上面是肝臟,下面是胃。我們順著胃十二指腸部位向小腸的方向找,不遠處就會看到,一條淡淡接近透明的管道連著肝臟的下部(見下圖2)。我們用手術剪根部托起后,發現里面有淡黃色的液體在流動。如果看不到的,可以用棉簽輕輕擦拭去除膽總管表面的脂肪后看的更清楚了。具體見下圖示:
圖1
圖3
找到并分離部分膽總管后,要先結扎遠心端(靠近腸的一段),用消毒棉線結扎住。然后靠近結扎處分離出1cm左右的膽總管。然后用眼科剪或大號針頭,在靠近結扎處,剪破或穿刺破一個小口(約膽總管的1/2內),然后用購買的專用實驗插管(頭部請剪成45-60度角)輕輕的插進去,邊插邊用鑷子輔助推進(不可過用力防止膽總管斷裂)。具體操作請見視頻:https://v.youku.com/v_show/id_XMTgxMDUyMTU3Mg==.html (請微信關注 515788166 ,后期會發布詳細的全套視頻教程)。
插管插進入不要太深,防止插入肝臟造成出血等(插入約1-1.5cm即可),用滅菌粗棉線固定兩三處(不可太用力防止把插管扎扁影響膽汁流出)。固定好后,看看是否有膽汁流出。如果沒有膽汁流出輕輕左右滾動一下插管(防止扭結堵?。?,如果膽汁順利流出,就順著插管固定好(千萬不要讓插管再轉動或扭轉),縫合后手術部位,消毒后,用無菌紗布蓋好手術部位。等所有大鼠手術實驗結束后(這時候大鼠全部清醒了),按照一定的角度擺放好,一起給藥,開始實驗。
第四步:給藥前一定要先確定大鼠膽汁能正常流出(這個實驗相對難度較大,為了防止有實驗失敗的,請多做幾只大鼠,擇膽汁能正常流出的開展實驗)。如果實驗開展時間過久,請及時給大鼠補充食物或能量,這個一般可以手動喂食或直接注射葡萄糖營養液。一切方法都不能影響實驗客觀結果為準,包括麻醉藥的選用原則也是。
第五步:實驗結束,收集膽汁即可。膽汁一般是分段收集的,時間到了請及時更換接收管,并將收到的膽汁,放入冰箱備測。建議及時檢測,不要放冰箱太久。檢測前請混勻膽汁,保證濃度均一。
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